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贴壁细胞处理方法

    一、细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的zui好办法。从细胞资源中心获得细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作。

二、 镜下观察：

未超过80%汇合度时，将瓶装的完全培养液移入无菌瓶中，留待日后培养用，原瓶（T25瓶）保留6-8ml完全培养液，放入37℃、5%CO2孵箱培养；

超过80%汇合度时，按要求比例消化传代。

三、消化方法

1、将瓶装的完全培养液移入无菌瓶中，留待日后培养用。加消化液0.25% Trypsin-EDTA (1X), Phenol Red消化。

2、T25瓶加3ml PBS，洗一次，弃上清，再加1ml消化液消化，显微镜下观察，等细胞完全脱离瓶壁分离成单个后，加培养基混匀，离心收集，按要求分瓶（视细胞密度而定1:2-1:3,1:3-1:6， 1:6-1:8），每T25瓶加培养基至6-8ml，37℃、5%CO2孵箱培养

四、若客户收到2ml小管细胞

收到细胞以后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超菌台内，严格无菌操作；然后将小管细胞转移至T25培养瓶，加入9ml左右含FBS的培养基混匀，放入培养箱过培养后查看细胞汇合度：若未超过80%汇合度，换液继续培养，据情况传代或者冻存。若超过80%汇合度，可直接进行传代（方法同上）

    该细胞使用培养基：1、DMEM(高糖)    2、R1640    3、R1640（改良）4、MEM(EBSS)    5、MEM(NEAA)    6、D/F12    7、F12    8、F12K    9、MaCcoy‘5A    10、L15    

血清要求：1、20%FBS    2、15%FBS    3、10%FBS    4、5%FBS    5、2.5%FBS    6、15%HS    7、10%HS    8、5%HS    9、2.5%HS    10、10%CCF(灭活)

四、细胞代数：      复苏人：     

冻存液：常规培养液+20%FBS+8%DMSO

上海奥陆生物